Преимплантационная генетическая диагностика
ПГД - метод, призванный помочь супружеским парам, имеющим повышенный риск передачи наследственного заболевания своему ребенку.
Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) является методом выявления наследственных заболеваний у эмбрионов до их переноса в матку. Она была разработана как метод, призванный помочь супружеским парам, имеющим повышенный риск передачи наследственного заболевания своему ребенку. До появления преимплантационной генетической диагностики единственным вариантом для таких пар было проведение пренатальной диагностики, главным недостатком которой является то что, если плод является носителем заболевания, супругам необходимо принять решение о прерывании беременности или ее сохранении, зная, что у них родится больной ребенок. После проведения диагностики эмбрионов в цикле ЭКО-ИКСИ пациентке переносят только здоровые эмбрионы, и женщина беременеет, зная, что вынашиваемый ею ребенок не является носителем генетического заболевания.
Многие пациенты желают заранее выбрать пол ребенка, что также можно сделать в нашей клинике при помощи ПГД.
Также преимплантационная генетическая диагностика проводится в случаях повышенного риска того, что эмбрионы будут иметь определенные хромосомные патологии. Такие патологии могут снизить вероятность имплантации, приводить к невынашиванию беременности или рождению ребенка с физическими или умственными отклонениями. Следует сказать, что проведение ПГД возможно не для всех болезней, имеющих генетическую причину, и, кроме того, не для всех наследственных заболеваний известен ген, определяющий проявление болезни.
Преимплантационная генетическая диагностика показана в случаях, когда у родителей выявлено носительство хромосомных перестроек, транслокаций, инверсий и других хромосомных и генетических патологий; поставлен диагноз привычного невынашивания беременности (более 2 выкидышей) или есть неудачные попытки ЭКО в анамнезе (более двух); а также старший репродуктивный возраст супружеской пары (женщина старше 37 лет или мужчина старше 40 лет).
МСОМЕ-ИМСИ как новый метод отбора сперматозоидов
С недавнего времени, после прохождения фундаментального обучения эмбриологов нашей клиники у ведущих мировых специалистов, в практику внедрены революционные методы МСОМЕ-ИМСИ. Что представляют собой данные методики? МСОМЕ (МSOME) (Motile Sperm Organelle Morphology Examination) это исследование морфологии внутренних структур сперматозоида, что возможно при использовании оптики с высокой разрешающей способностью (в конкретном случае это увеличение в 6300 раз); ИМСИ (IMSI) (Intracytoplasmic Morphologically selected Sperm Injection) представляет собой инъекцию морфологически отобранного сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки. Использование технологии МСОМЕ-ИМСИ, основанной на тщательной оценке оплодотворяющей способности сперматозоидов, повышает вероятность наступления беременности до 70%. Эффективность технологии МСОМЕ - ИМСИ получила всемирное признание и научные труды по данной технологии опубликованы в ведущих авторитетных медицинских изданиях.
При МСОМЕ происходит оценка только подвижных сперматозоидов, которые могут быть отобраны для ИКСИ, проводимом при малом увеличении. Оценка подвижных сперматозоидов с грубыми нарушениями строения, такими как аморфная, конусовидная, круглая, точечная или многоядерная головка, легко идентифицирующимися при увеличении х200-х400 не производится, поскольку данные сперматозоиды в нормальных условиях исключаются из проводимого ИКСИ. Результат анализа представляет собой количество (процент) сперматозоидов без ядерной патологии от исходно оцениваемых 150 подвижных сперматозоидов без грубых нарушений, экстраполированные на весь объем эякулята. Таким образом, данный результат отражает долю (количество) сперматозоидов, использование которых для ИКСИ потенциально приводит к увеличению частоты наступления беременности и уменьшению частоты невынашивания, и, как следствие, показывает возможность (необходимость) проведения ИМСИ у данной пары. Метод MCOME позволяет выбрать наиболее приемлемое лечение для пациентов с мужским фактором бесплодия. Этот метод может выбрать тех пациентов с мужским фактором бесплодия кому показана инсеминация спермой мужа, ЭКО, ИКСИ или ИМСИ, как наиболее подходящий непосредственно для них метод оплодотворения, тем самым значительно экономит время, здоровье и финансовые затраты пациентов.
ИМСИ является существенным дополнением к процедуре ИКСИ и основывается на микроиньекции отобранного морфологически, здорового сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки (сперматозоиды с нормальной морфологией и высокой вероятностью успешной беременности согласно критериям МСОМЕ), и, таким образом, представляет собой ИКСИ с использованием сперматозоидов, отобранных при помощи МСОМЕ. Данный метод отбора сперматозоидов занимает гораздо больше времени, чем традиционная процедура ИКСИ, однако позволяет существенно повысить эффективность ЭКО в случаях тяжелого мужского фактора бесплодия. Метод ИМСИ показан пациентам с двумя и более неудачными попытками ИКСИ и пациентам с мужским бесплодием и высоким уровнем тератозооспермии, что позволяет добиться таких преимуществ, как:
- Высокий процент наступления беременности
- Низкая вероятность выкидыша
- Низкая вероятность врожденных пороков
- Решение проблем бесплодия в случаях когда другие методы лечения не эффективны
Вспомогательный хэтчинг
Кроме того, по показаниям эмбрионам проводится лазерный вспомогательный хэтчинг. Вспомогательный хетчинг - это микроманипуляционная процедура воздействия на блестящую оболочку эмбриона, облегчающая его вылупление на стадии бластоцисты. Использование этого метода повышает эффективность лечения в программе ЭКО:
- у пациенток старше 36 лет
- после нескольких неудачных попыток ЭКО
- у пациенток с поликистозными изменениями яичников
- при утолщенной блестящей оболочке эмбриона
Перед имплантацией в матку эмбрион должен выйти из наружной оболочки; этот процесс получил название хэтчинг – «вылупление». Считается, что проблемы с хэтчингом могут частично объяснить, почему у некоторых супружеских пар не наступает беременность. Во время вспомогательного хэтчинга при помощи лазерного импульса проделывается отверстие в блестящей оболочке эмбриона непосредственно перед его переносом в матку в программах ЭКО, что облегчает его естественное «вылупление» и имплантацию. В научной литературе приводятся данные о том, что у пациенток старшего репродуктивного возраста зона пеллюцида имеет повышенную плотность, что затрудняет «вылупление» из неё эмбриона. Блестящая оболочка эмбриона является его защитным барьером, и до недавнего времени процедуры механического или кислотного хэтчинга являлись достаточно травматичными. Установленная в лаборатории эмбриологии нашей клиники эффективная и безопасная для эмбрионов лазерная установка последнего поколения позволяет избежать повреждения клеток эмбриона при проведении данной процедуры.
Если у мужчины нет сперматозоидов в эякуляте...
При отсутствии сперматозоидов в эякуляте, т.е. у пациентов с диагнозом азооспермия, возможно оплодотворение яйцеклеток с помощью метода ИКСИ сперматозоидами, полученными из яичка и/или придатка яичка мужчины. Азооспермия встречается у 14-20% бесплодных мужчин и в четверти всех случаев обусловлена врожденным двусторонним отсутствием или непроходимостью семявыводящих путей. В том случае, еcли микрохирургическое восстановление проходимости семявыводящих путей несостоятельно или его попытки оказались неудачными, существует реальная возможность микрохирургического получения спермотозоидов непосредственно из придатка яичка (МЕСА). При секреторной азооспермии, когда сохранены лишь единичные очаги сперматогенеза в яичках, множественная открытая биопсия яичка (ТЕСЕ) позволяет получать единичные сперматозоиды, достаточные для последующего достижения беременности после проведения ИКСИ. Но наряду с хирургическими существуют перкутанные (чрезкожные) методы aспирации сперматозоидов непосредственно из придатка яичка (ПEСA) или яичка (ТЕСА) с помощью специальной тонкой иглы. После получения материала из придатка яичка или яичка, эмбриолог выделяет и отбирает из него морфологически нормальные живые сперматозоиды, пригодные для оплодотворения.
В Клинике «Дети из пробирки» частота наступления беременности после переноса эмбрионов, полученных в результате использования тестикулярных или эпидидимальных сперматозоидов, в настоящее время составляет около 80%.
Криоконсервация эмбрионов, спермы и ооцитов
При стимуляция суперовуляции для созревания большого количества яйцеклеток в циклах ВРТ, как правило, развивается большое количество эмбрионов хорошего качества. Поскольку в нашей клинике обычно в полость матки переносят не более двух эмбрионов, у многих пациентов после переноса остаются «лишние» эмбрионы. Неиспользованные в процессе ЭКО эмбрионы подвергаются криоконсервации. Что это дает? Криоконсервация эмбрионов позволяет хранить их в замороженном состоянии долгое время, использовать по показаниям у этой же пациентки, если предыдущее ЭКО не увенчалось успехом или если женщина захочет вновь родить ребенка. Это означает, что женщине не придется повторно проходить процедуру стимуляции овуляции, пункцию яичников, что делает процесс экстракорпорального оплодотворения менее емким и более доступным по цене.
Криоконсервация эмбрионов является одним из хорошо отработанных методов вспомогательных репродуктивных технологий. Первый ребенок после переноса размороженного эмбриона родился в 1984 году. Шансы на наступления беременности после переноса размороженных эмбрионов ниже, чем при переносе свежих эмбрионов, однако мы настоятельно советуем всем своим пациентам, у которых получено большое количество эмбрионов отличного качества, осуществлять их криоконсервацию, поскольку наличие замороженных эмбрионов является для пациентов своего рода «страховкой» на тот случай, если беременность не наступит. Тем не менее, поскольку криоконсервации подлежат только эмбрионы отличного качества, которые способны привести к рождению здорового ребенка, криоконсервация возможна только примерно у половины пациентов ЭКО.
В настоящее время в Клинике «Дети из пробирки» используется как традиционный метод медленной криоконсервации эмбрионов 3 дня развития на стадии дробления, так и новый метод сверхбыстрого замораживания – витрификация бластоцист и яйцеклеток. Витрификация бластоцист была введена в практику повседневной работы Клиники около 2 лет назад и зарекомендовала себя как надежный метод долговременного сохранения эмбрионов, при котором выживаемость бластоцист составляет более 90 процентов и обеспечивает бережное отношение к эмбрионам наших пациентов.
После прохождения обучения специалистов нашей клиники у разработчиков наиболее совершенного на сегодняшний день метода витрификации яйцеклеток, мы также предлагаем пациентам возможность долговременного сохранения своих ооцитов. Данный метод обеспечивает выживаемость практически всех замороженных яйцеклеток, при этом подавляющее большинство из них после оттаивания оплодотворяется и успешно развивается. Благодаря высокой квалификации наших эмбриологов, в Клинике «Дети из пробирки» наблюдается практически максимально возможная частота наступления беременности в циклах с использованием криоконсервированных эмбрионов. Исход переноса размороженных эмбрионов схож со стандартным циклом ЭКО в отношении таких осложнений, как процент замерших беременностей, внематочных беременностей, выкидышей и преждевременных родов. В настоящее время нет данных, которые показали бы более высокую частоту врожденных патологий у детей, рожденных в результате переноса замороженных эмбрионов.
В нашей клинике мы предлагаем услугу криоконсервации спермы.
В нашей клинике мы предлагаем услугу криоконсервации спермы. Эта процедура рекомендуется, если известно, что в день пункции фолликулов в рамках программы ЭКО муж будет отсутствовать. Криоконсервация спермы позволяет сохранять репродуктивный материал в ситуациях, когда пациенту предстоит пройти оперативное вмешательство или другие лечебные процедуры (лучевая терапия, химиотерапия), сопровождающиеся высоким риском снижения фертильности либо если профессиональная деятельность мужчины связана с высоким риском для жизни и здоровья. Также мы настоятельно рекомендуем данный метод в случае проведения у пациента получения сперматозоидов хирургическим путем (подробнее в разделе «Если у мужчины нет сперматозоидов в эякуляте») во избежание повторной операции в будущем.
В Клинике «Дети из пробирки» создан криобанк доноров спермы. Доноры спермы проходят специальное обследование, включающее в себя определение:
- группы крови
- резус-фактора
- ВИЧ-инфекции и особо опасных инфекций
- инфекционных и венерических заболеваний
- генетическое обследование
- заключение терапевта, нарколога и психиатра
и таким образом являются генетически, психически и соматически здоровыми мужчинами. Все доноры спермы имеют высшее образование, здорового ребенка, возраст до 35 лет и приятную внешность без характерно выраженных черт лица.
Пациенты имеют возможность выбора донора, подходящего по фенотипу.
ИКСИ – интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида
В случае наличия у супружеской пары мужского фактора бесплодия в нашей клинике используются специальные микроманипуляционные методы. ЭКО + ИКСИ - оплодотворение яйцеклетки единичным сперматозоидом при субфертильных показателях спермы мужа. Метод ЭКО, вошедший в историю репродуктивной медицины как один из наиболее эффективных способов лечения различных форм женского бесплодия, имеет весьма ограниченные возможности в случаях тяжелого нарушения сперматогенеза.
ИКСИ является методом выбора при таких серьезных формах мужского бесплодия, как:
- олигозооспермия
- астенозооспермия
- тератозооспермия
- эякуляторные дисфункции (ретроградная эякуляция)
- высокий титр антиспермальных антител
Метод заключается в непосредственной микроинъекции сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки и имеет высокую эффективность, превосходящую стандартную процедуру ЭКО. Также метод ИКСИ применяется в случаях, когда у женщины видны под микроскопом нарушения строения яйцеклеток при наблюдении их после пункции фолликулов, ранее было две и более неудачных попытки ЭКО или в предшествующей попытке было плохое оплодотворение яйцеклеток. Если у мужчины выявлены наследственные патологии, являющиеся причиной бесплодия, которые могут быть переданы от отца к сыну, перед проведением ИКСИ мы рекомендуем проведение медико-генетического консультирования.
На сегодняшний день метод ИКСИ применяется более 15 лет.
На сегодняшний день метод ИКСИ применяется более 15 лет, и во всем мире после проведения ИКСИ уже родилось несколько сот тысяч детей. В результате применения данного метода высококвалифицированными эмбриологами нашей клиники процент оплодотворения после ИКСИ составляет около 90%, практически все оплодотворенные яйцеклетки начинают нормально дробиться. К другим факторам, влияющим на частоту наступления беременности после ИКСИ, относятся возраст женщины, продолжительность бесплодия и количество перенесенных эмбрионов, при этом в Клинике «Дети из пробирки» частота наступления беременности после проведения ИКСИ составляет около 50%, что свидетельствует о высочайшем профессионализме сплоченной команды врачей и эмбриологов.
Оплодотворение и культивирование эмбрионов in vitro.
После пункции фолликулов аспират, содержащий яйцеклетки, немедленно передается в лабораторию эмбриологии, где эмбриолог под микроскопом отбирает яйцеклетки, окруженные кумулюсными клетками. Каждый такой комплекс яйцеклетки с кумулюсными клетками промывается в специальной среде, и затем оценивается зрелость яйцеклеток, после чего их помещают в специальную среду культивирования и переносят в инкубатор, где они ожидают оплодотворения.
Во время проведения пункции фолликулов у женщины, ее муж собирает сперму путём мастурбации в специальный нетоксичный стерильный контейнер. В случае невозможности присутствия мужчины в клинике в день пункции фолликулов или затруднениях при сдаче спермы можно предварительно криоконсервировать (заморозить) сперму, которая затем размороживается в день пункции фолликулов жены и используется в цикле ЭКО.
После сбора спермы сперматозоиды отмываются от семенной жидкости с помощью центрифугирования в градиенте плотности, что позволяет отобрать наиболее подвижные и морфологически нормальные сперматозоиды. Определенное количество подвижных сперматозоидов (обычно 100000 сперматозоидов/яйцеклетку) смешивают с яйцеклетками (эту процедуру называют «оплодотворением в пробирке» или инсеминированием in vitro, внимание – не путать с внутриматочной инсеминацией) и помещают в инкубатор. Оплодотворение обычно проводят через 39-40 часов после инъекции ХГЧ (Прегнила). Условия в инкубаторе и состав питательной среды имитируют условия в фаллопиевых трубах, создавая эмбриону максимально возможные благоприятные условия in vitro. Через 18 часов после добавления сперматозоидов к яйцеклеткам или ИКСИ оценивается количество нормально оплодотворенных яйцеклеток. Яйцеклетки с аномальным оплодотворением (например, содержащие три пронуклеуса вместо двух), а также неоплодотворившиеся яйцеклетки в дальнейшем не используются. Нормально оплодотворившиеся яйцеклетки культивируются далее и их качество оценивают каждые 24 часа. Оценка эмбрионов происходит на основании их внешнего вида и скорости дробления. В Клинике «Дети из пробирки» эмбрионы, как правило, культивируются до пятого дня развития и по достижении ими стадии бластоцисты происходит перенос 1-2 лучших эмбрионов в полость матки пациентки. Оставшиеся бластоцисты высокого и хорошего качества криоконсервируются при помощи метода витрификации, который обеспечивает более чем 90% выживаемость эмбрионов после этой процедуры.
Перенос бластоцист снижает также и вероятность потенциально опасных многоплодных беременностей.
Культивирование эмбрионов в течение 5 дней вместо 3 позволяет провести отбор наиболее жизнеспособных эмбрионов, которые после переноса дадут начало новой жизни, так как эмбрионы с нарушениями развития или эмбрионы с генетическими аномалиями останавливаются в развитии до того, как они дорастут до стадии бластоцисты. Кроме того, перенос бластоцист в матку является более естественным, поскольку в природе эмбрион попадает из фаллопиевой трубы в матку именно на этой стадии. Перенос бластоцист снижает также и вероятность потенциально опасных многоплодных беременностей. Высокая частота имплантации бластоцист позволяет переносить в матку меньше эмбрионов (как правило, один или два), снижая риск многоплодных беременностей и связанных с ними осложнений.
Лаборатория эмбриологии Клиники «Дети из пробирки»
Одним из основных факторов, определяющих результативность работы (частоты наступления беременности) любой клиники ЭКО, является работа лаборатории эмбриологии.
В Клинике «Дети из пробирки» лаборатория эмбриологии представляет собой изолированное помещение, в котором поддерживаются постоянные микроклиматические условия, оснащенное системой приточно-отточной вентиляции с высокоэффективной фильтрацией микрочастиц. Лаборатория эмбриологии Клиники оснащена самым современным оборудованием: это достаточное количество инкубаторов, как традиционных с водяной рубашкой, так и сверхсовременных компьютеризированных, что позволяет проводить культивирование эмбрионов пациентов в индивидуальных инкубаторах; рабочая станция для проведения микроманипуляций с яйцеклетками и эмбрионами; эффективная и безопасная для эмбрионов лазерная установка, применяемая для проведения вспомогательного хэтчинга и биопсии эмбрионов в рамках программ преимплантационной генетической диагностики; микроскопическая установка для отбора абсолютно нормальных сперматозоидов под сверхвысоким увеличением (ИМСИ).
Все оборудование регулярно проходит проверку и служит созданию максимально комфортных условий для яйцеклеток и эмбрионов.
Все оборудование выпущено ведущими мировыми производителями, регулярно проходит проверку и служит созданию максимально комфортных условий для яйцеклеток и эмбрионов. На базе лаборатории происходит регулярное обучение эмбриологов из центров ЭКО России и зарубежья. Эмбриологи клиники являются членами Российской ассоциации Репродукции человека, Европейского общества репродукции человека и эмбриологии, Европейского сообщества ученых в области репродукции (Alpha), Американского общества репродуктивной медицины и систематически проходят повышение квалификации и дополнительное профессиональное обучение в ведущих мировых центрах по лечению бесплодия.


